针对上述问题，香港大学汪卫平教授团队提设计了一种光敏型脂质纳米颗粒（LNP）制剂，用于联合递送FSP1 siRNA与光敏剂，以实现结肠癌免疫治疗的协同效应（图1），维替泊芬与脂质成分共组装形成具有高siRNA载药能力的LNP。通过引入阳离子辅助脂质DOTAP对表面特性进行调控，进一步优化了负载维替泊芬的光敏型LNP，从而提升其在结肠癌细胞中的siRNA转染效率。光敏脂质纳米颗粒（FSP1/LNPs）通过沉默FSP1基因并产生活性氧（ROS），在结肠癌细胞中引发协同性铁死亡效应。这种机制进一步诱导免疫细胞死亡（ICD）和肿瘤抗原释放，从而促进树突状细胞（DC）成熟及细胞毒性T淋巴细胞活化。该研究证实FSP1基因沉默与光动力疗法（PDT）在结肠癌细胞中具有显著协同效应，为光敏脂质纳米颗粒在癌症治疗中的临床转化开辟了新途径。该文章于2025年7月15日以《Living therapeutics of nonpathogenic bacteria as biosynthesis factory and active carriers for enhancing tumor-targeted therapy》为题发表于《ACS Nano》（DOI：10.1021/acsnano.5c06115）。

图1. FSP1/LNPs的生物合成和抗肿瘤治疗示意图

（1）光敏脂质纳米粒子的筛选与优化

为了制备光敏脂质纳米粒子（LNPs），将不同光响应小分子（如卟啉、吲哚菁、BODIPY）以5mol%或10mol%的摩尔比掺入LNP配方（图2A、B）。DLS结果显示，这些分子可成功掺入LNPs，尺寸为125-175nm，PDI小于0.3（图2D）。琼脂糖凝胶电泳表明，仅卟啉类分子（如Ce6、Verteporfin、Hemin）能与脂质共组装且不影响siRNA包载（图2C）。最终，具有NIR光响应性的FDA批准光敏剂Verteporfin被选为制备光敏LNPs的材料，其摩尔比为5mol%。，阳离子脂质DOTAP能显著提高LNPs的细胞内化和内质网逃逸能力。CT26细胞与含0或5mol% DOTAP的光敏LNPs孵育，CLSM成像显示，5mol% DOTAP组的siRNA与内质网信号共定位水平低于0mol%组（图2I）。因此，选择了5mol% DOTAP和5mol% DSPC作为辅助脂质，以优化LNP配方。鉴于MC3 LNPs在某些癌细胞中siRNA转染效率有限，通过调节光敏LNPs的表面性质，以优化其在结肠癌细胞中的siRNA递送效率。随着DOTAP摩尔比从0增加到10mol%，LNPs的尺寸从130nm增加到190nm，PDI略有下降（图2E），Zeta电位从-16.2mV增加到3.5mV（图2F）。5mol% DOTAP的LNPs在1小时和4小时后的细胞摄取水平分别比不含DOTAP的LNPs高出2.54倍和2.06倍（图2H）。因此，选择了5mol% DOTAP和5mol% DSPC作为辅助脂质。

图2.光敏型脂质纳米颗粒（LNP）制剂的筛选与优化。(A)含有不同卟啉类、吲哚菁类或BODIPY基光响应分子的溶液示意图，分别采用高和低摩尔比配制。(B)不同卟啉类、吲哚菁类或BODIPY基光响应分子的化学结构示意图。(C)含10 mol %光响应分子的siRNA负载型光敏LNP制剂琼脂糖凝胶电泳检测结果。(D)含10 mol %光响应分子的光敏LNP制剂粒径与PDI值对比。(E)不同DOTAP摩尔比负载维替泊芬的光敏LNP粒径与PDI值对比。(F)不同DOTAP摩尔比下负载维替泊芬的光敏脂质纳米颗粒（Zeta电位值，n=3）。(G)细胞孵育4小时后的流式细胞术检测结果。(H) CT26细胞经不同DOTAP摩尔比负载维替泊芬的光敏脂质纳米颗粒在1或4小时后的细胞内化水平。(I)不含DOTAP与含5 mol %DOTAP的光敏脂质纳米颗粒的内体逃逸能力对比

（2）FSP1/LNPs的制备与表征

为了制备FSP1/LNPs，将FSP1 siRNA包裹在设计好的光敏LNPs中。FSP1/LNPs的尺寸为145.43±2.55nm，PDI值为0.11±0.05，表明制备后具有良好的尺寸分布（图3A）。透射电子显微镜（TEM）成像显示，纳米粒子呈球形且分散良好，与尺寸分布结果一致。测量得到的Zeta电位为-2.75±0.51mV，负表面电荷可能有助于静脉注射后延长血液循环时间（图3B）。此外，纳米粒子在磷酸盐缓冲液（PBS）或胎牛血清（FBS）中在生理条件下至少可稳定96小时，尺寸约为150nm（图3C）。为了研究合适的N/P比，进行了琼脂糖凝胶电泳，结果表明，当N/P比超过3时，纳米粒子展现出良好的siRNA包载能力（图3D）。UV-vis吸收光谱分析表明，FSP1/LNPs在254nm（FSP1 siRNA的峰值）以及420和690nm（Verteporfin的峰值）处展现出显著的吸收峰，表明成功包裹了这两种药物分子（图3E）。细胞毒性实验表明，CT26细胞在经过不同浓度的Verteporfin和FSP1 siRNA处理后，其细胞活性在光照条件下显著降低（图3F）。通过SynergyFinder在线平台计算得出的协同分数表明，FSP1基因沉默和光动力疗法（PDT）之间存在显著的协同效应（图3G）。这表明，FSP1 siRNA和Verteporfin可以被成功包载到工程化的LNP配方中，并且FSP1基因沉默与PDT在结肠癌细胞中具有显著的协同效应。

图3. FSP1/LNPs的制备与表征。(A) FSP1/LNPs粒径分布及透射电镜图像（比例尺：200 nm)。(B)FSP1/LNPs的Zeta电位。(C) FSP1/LNPs在37°C PBS溶液中稳定性测试（96小时，数据以均值±标准差表示，n = 3)。(D)不同N/P比的FSP1/LNPs琼脂糖凝胶电泳分析。(E)FSP1 siRNA、Verteporfin及FSP1/LNPs的UV−vis吸收光谱。(F)CT26细胞经Verteporfin和FSP1 siRNA处理后光照存活率。(G) CT26细胞经光照处理后Verteporfin与FSP1 siRNA的协同效应评分。(H)免疫共沉淀实验显示游离siRNA、Lipo3000-siRNA复合物及光敏脂质纳米颗粒的细胞摄取水平（n = 3）。(I) CT26细胞经不同内吞抑制剂处理后FSP1/LNPs的细胞内化水平（n = 3）

（3）FSP1/LNP的细胞毒性和FSP1基因沉默效应

由于FSP1 siRNA和Verteporfin已成功包裹进光敏脂质纳米粒子（LNPs）中，接下来研究了它们在结肠癌细胞中的内化行为。与Lipofectamine 3000（Lipo3000）相比，纳米粒子在将siRNA递送至CT26细胞方面表现出略微更好的转染能力（图3H）。同时，FSP1/LNPs也能促进Verteporfin的细胞内递送，表明其能够共同递送疏水性药物分子和基因治疗药物用于癌症治疗（图S8）。为了探索光敏LNPs的内吞途径，CT26细胞在FSP1/LNPs处理前预先用各种内吞抑制剂处理。结果表明，M-β-CD、氯丙嗪和基因斯坦能显著降低细胞摄取水平，表明FSP1/LNPs主要通过脂筏、网格蛋白和洞穴体介导的内吞途径进入细胞（图3I）。为了探索纳米粒子的抗肿瘤性能，CT26细胞暴露于FSP1/LNPs或阴性对照siRNA包裹的光敏LNPs（NC/LNPs）中，有或没有光照。MTT实验结果表明，与不同浓度的对照组相比，FSP1/LNPs（+）组能显著抑制结肠癌细胞增殖（图4A）。此外，结果表明，FSP1/LNPs（+）组能促进乳酸脱氢酶（LDH）释放，表明该处理破坏了CT26细胞的细胞膜完整性，并诱导了细胞膜孔的形成（图4B）。

为了确定结肠癌细胞中的氧化应激情况，采用DCFH-DA检测细胞内活性氧（ROS）水平。流式细胞仪结果表明，NC/LNPs（+）和FSP1/LNPs（-）组均能增加细胞内ROS水平，这可能分别源于PDT效应和FSP1抑制诱导的铁死亡（图4C）。特别是，FSP1/LNPs（+）组与其它组相比展现出最高的ROS生成水平，表明PDT与铁死亡之间的协同作用增强了氧化应激。此外，FSP1/LNPs能促进结肠癌细胞凋亡，在NIR光照射后，与NC/LNPs（+）组相比，FSP1/LNPs（+）组的晚期凋亡水平高出1.71倍（图4D、E）。此外，活死细胞染色实验也显示出类似的趋势，FSP1/LNPs（+）组的细胞死亡水平最高（图4F）。为了探索FSP1基因沉默效果，qPCR实验结果表明，与对照组相比，FSP1/LNPs能显著降低结肠癌细胞中FSP1 mRNA表达水平（图4G）。此外，Western blot实验表明，与对照组相比，FSP1/LNPs（+）组的FSP1蛋白表达水平降低了57%（图4H）。这些结果验证了FSP1/LNPs在结肠癌细胞中有效沉默FSP1基因的能力。鉴于FSP1在保护细胞免受铁死亡中的关键作用，其表达水平的降低可能会破坏这种平衡，并进一步促进脂质过氧化和铁死亡。总之，FSP1 siRNA和Verteporfin可以借助光敏LNP配方高效共递送至CT26细胞中，以降低FSP1基因表达，增强氧化应激，并促进细胞凋亡。

图4. FSP1脂质体的细胞毒性及FSP1基因沉默效果。(A) CT26细胞经不同制剂处理后的存活率。(B)经不同处理的CT26细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放量。(C)通过流式细胞术检测CT26细胞活性氧生成。(D)不同制剂处理的CT26细胞凋亡水平。(E)凋亡程度定量分析。(F)不同处理组CT26细胞活死染色结果。(G)不同处理后CT26细胞FSP1 mRNA表达水平。(H)不同处理后CT26细胞FSP1与GAPDH表达水平的Western blot检测

（4）FSP1/LNP引起的铁死亡和氧化损伤

由于光敏脂质纳米粒子（LNPs）能够促进活性氧（ROS）的生成并实现FSP1基因沉默，接下来研究了它们在结肠癌细胞中引起的铁死亡和氧化损伤。首先，通过BODIPY-C11探针检测细胞内脂质过氧化水平，该探针在正常情况下呈现红色荧光，与脂质过氧化物反应后会转变为绿色荧光。共聚焦成像结果显示，与对照组相比，NC/LNPs（+）和FSP1/LNPs（−）组显示出更高的绿色荧光，表明光动力疗法（PDT）和FSP1基因沉默均能触发脂质过氧化（图5A）。然而，经过光照处理的FSP1/LNPs组展现出更强的组合效应，其脂质过氧化水平显著高于其他组（图5B）。FSP1是保护癌细胞免受铁死亡的关键蛋白，通过将辅酶Q10（CoQ10）转化为泛醇（CoQ10H2）发挥作用。因此，采用ELISA试剂盒测定了细胞内CoQ10含量，结果表明，FSP1/LNPs（+）组显著提高了CoQ10水平，这表明经过纳米粒子和光照处理后，FSP1蛋白的生物活性降低（图5C）。为了证实铁死亡的成功诱导，细胞内抗氧化剂如谷胱甘肽（GSH）保护癌细胞免受氧化应激和铁死亡的影响。采用检测试剂盒测定了细胞内GSH水平，结果表明，与对照组相比，经过光照处理的两种LNPs均能降低GSH水平，这可能是由于光动力疗法产生的ROS以及随后的氧化损伤导致GSH消耗（图5D）。通过利用光动力疗法产生ROS并清除还原剂，可能使FSP1 siRNA诱导的铁死亡更加敏感，并增强下游的氧化损伤。

据报道，铁死亡会导致脂质过氧化物的积累，这些过氧化物可能会影响细胞器膜中的脂质，并扩散到细胞核中与DNA形成加合物，从而导致细胞器和细胞核损伤。因此，首先采用γ-H2AX免疫荧光实验评估核损伤水平。共聚焦成像结果显示，与FSP1/LNPs（+）组相比，其他组的绿色荧光强度显著增强，表明经过光照处理的FSP1/LNPs组显著增强了γ-H2AX水平（图5E、F）。此外，DAPI染色显示，FSP1/LNPs处理会影响细胞核形态，使其变得圆润且萎缩。这些结果共同表明，DNA双链断裂和细胞核损伤严重。除了DNA氧化损伤外，线粒体功能也可能因脂质过氧化物的积累而受到损害。采用JC-1实验评估FSP1/LNPs对线粒体膜电位的影响。在正常线粒体中，JC-1形成聚合物并呈现红色荧光，而在受损线粒体中，它会变成单体并呈现绿色荧光。流式细胞仪分析结果表明，与对照组相比，NC/LNPs（+）和FSP1/LNPs（−）组均能降低线粒体膜电位并导致线粒体功能障碍，其红绿比值较低（图S11）。重要的是，经过光照处理的FSP1/LNPs组显示出铁死亡和光动力疗法对线粒体损伤的协同效应（图5G）。此外，采用透射电子显微镜（TEM）观察经过FSP1/LNPs和光照处理后的CT26细胞的线粒体形态。成像结果显示，FSP1/LNPs诱导线粒体嵴结构丧失并导致线粒体碎裂（图5H）。由于线粒体在能量产生和维持细胞稳态中发挥着关键作用，线粒体损伤可能会进一步加剧氧化应激并促进促凋亡因子的释放。

图5. 铁死亡与FSP1/LNPs引发的氧化损伤。(A)共聚焦激光扫描显微镜图像显示不同处理条件下CT26细胞的脂质过氧化水平。(B) BODIPY-C11绿色荧光定量分析显示氧化损伤程度。(C)不同制剂处理CT26细胞后的细胞内辅酶Q10水平。(D) CT26细胞内谷胱甘肽水平。(E)共聚焦显微镜图像显示CT26细胞中γ-H2AX蛋白表达水平。(F) γ-H2AX水平定量分析。(G) JC-1单体标记的CT26细胞比例。(H)正常细胞与FSP1/LNPs（+）处理组CT26细胞的横截面透射电镜图像。(I) NC siRNA与FSP1 siRNA处理对NIH 3T3细胞活力的影响评估。(J)使用NC siRNA或FSP1 siRNA处理后对CT26细胞活力的评估。(K)未进行光照射时对NC/LNPs和FSP1/LNPs孵育的NIH 3T3细胞活力的评估

（5）转录组测序和分析

为了探究FSP1基因沉默和光动力疗法（PDT）对结肠癌细胞的联合效应，对正常或经FSP1/LNPs处理的CT26细胞的总RNA进行了转录组测序分析。在分析的56,691个基因中，FSP1/LNPs（+）组有1,290个基因表达下调，1,437个基因表达上调（图6A）。基因集富集分析（GSEA）显示，差异表达基因（DEGs）在脂质代谢（脂质过氧化）、DNA损伤、表观遗传调控（细胞核损伤）和p53信号通路（促凋亡效应）中显著富集（图S12）。此外，基因本体（GO）富集分析显示，FSP1/LNPs（+）组对DNA结合、细胞器膜、粘附和迁移、细胞增殖以及胆固醇稳态等生化途径产生了显著影响（图S13）。此外，京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析表明，胆固醇代谢、IL-17、凋亡和PI3K-Akt等信号通路在FSP1/LNPs处理后受到显著影响。这些通路涉及结肠癌细胞中的脂质过氧化、细胞氧化还原平衡和细胞增殖。具体到差异表达基因，Egr1、Txnip、Btg2和Rnd1基因在铁稳态、氧化还原平衡和抗氧化防御中起关键作用，这些基因在FSP1/LNPs（+）处理后显著上调（图6B）。相反，Cp、Scd1和Sema5a基因可能促进脂质过氧化物的清除并降低对铁死亡的敏感性，这些基因在FSP1/LNPs（+）处理后显著下调。此外，Gadd45g基因的上调表达与DNA损伤调控相关，表明FSP1/LNPs处理后细胞核损伤显著。Rhbdd1基因的下调表达表明线粒体功能障碍和促存活信号通路的中断。最后，四个与迁移相关的基因，包括Nrp2、Grem1、Fn1和Slit3，在FSP1/LNPs（+）处理后显著下调，表明FSP1/LNPs可能抑制结肠癌转移并降低侵袭性。转录组测序分析表明，FSP1/LNPs在光照条件下能够影响与铁死亡和氧化应激相关的基因表达，从而促进FSP1基因沉默和PDT的协同效应。

（6）免疫原性细胞死亡与树突状细胞成熟

为了探索抗肿瘤免疫反应，通过免疫荧光实验检测高迁移率族蛋白1（HMGB1）和钙网蛋白（CRT）的细胞内水平。成像结果显示，与FSP1/LNPs（+）组相比，其他组的细胞核中HMGB1水平显著降低，荧光强度最低（图6C、D）。从CT26细胞中释放的HMGB1可能作为危险信号以刺激抗肿瘤免疫反应。此外，在光照条件下，CRT在FSP1/LNPs组的细胞膜上的表达显著上调，明显高于NC/LNPs（+）和FSP1/LNPs（-）组，表明ROS产生和FSP1抑制的协同作用（图6E、F）。CRT的暴露可能作为免疫原性信号，促进免疫细胞吞噬垂死的癌细胞，从而增强树突状细胞（DCs）的成熟。三磷酸腺苷（ATP）是另一种DAMP信号，除了HMGB1和CRT之外。通过荧光素酶检测试剂盒测定经各种处理后的细胞内ATP水平。如图6I所示，与对照组相比，FSP1/LNPs加光照处理使细胞内ATP水平降低了40%。将骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）暴露于经处理的CT26细胞的上清液中。流式细胞仪分析显示，FSP1/LNPs（+）处理显著增加了共刺激标记物CD80和CD86的表达（图6G）。此外，成熟DCs的CD80+CD86+双阳性细胞群从对照组的22.37%增加到FSP1/LNPs（+）组的52.93%（图6H）。据报道，成熟DCs上的CD80和CD86能够增强它们刺激细胞毒性T淋巴细胞的能力，并促进适应性免疫活性。基于上述结果，推测FSP1/LNPs具有在NIR光照条件下促进结肠癌细胞凋亡、DAMPs释放和DC成熟的潜力，以重塑免疫抑制性微环境并激发强大的抗肿瘤免疫反应。

图6. FSP1/脂质纳米颗粒对免疫细胞样浆细胞（ICD）和树突状细胞（DC）成熟的影响。(A)火山图展示正常CT26细胞与经FSP1/脂质纳米颗粒（+）处理的CT26细胞之间的差异表达基因（DEGs）。(B)热图呈现正常细胞与FSP1/脂质纳米颗粒（+）处理细胞间的差异表达基因。(C)共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）图像显示CT26细胞中HMGB1蛋白表达。(D) HMGB1表达定量分析结果。(E) CLSM图像展示CT26细胞中环状转录因子（CRT）表达。(F) CRT表达定量分析结果。(G)流式细胞术检测CT26上清液培养后骨髓树突状细胞（BMDCs）成熟情况。(H)成熟CD80+ CD86+ BMDCs数量统计。(I) CT26细胞内ATP水平的评估

（7）活体成像和抑制肿瘤生长

为探究光敏脂质纳米粒子（LNPs）的生物分布与抗肿瘤生长效果，通过构建了CT26肿瘤的BALB/c小鼠模型。经尾静脉注射后，通过活体成像系统（IVIS）在不同时间点检测游离光敏剂与FSP1/LNPs的生物分布。结果显示，FSP1/LNPs组肿瘤积累水平高于游离药物组，约4小时达到峰值（图7A）。小鼠于24小时后处死，收集肿瘤及主要器官进行IVIS成像。结果表明，纳米粒子主要在肿瘤和肝脏中积累，与之前关于LNPs分布的报道一致（图7B）。定量分析显示，纳米粒子的肿瘤内荧光强度是游离药物的1.75倍，这可能归因于更长的循环时间、优化的表面性质以及增强的渗透与滞留（EPR）效应（图7C）。这些数据表明，工程化的LNP配方在静脉给药后具有高效将药物分子输送至肿瘤组织的能力。因此，在肿瘤部位进行NIR光照时，光敏LNPs将触发氧化损伤和铁死亡，以协同抑制肿瘤进展。

随后，在小鼠肿瘤模型中测试了FSP1/LNPs的治疗效果。小鼠随机分为五组，分别接受指定治疗（图7D）。12天时收集肿瘤并拍照（图7E）。肿瘤体积曲线显示，与对照组相比，FSP1/LNPs（-）和NC/LNPs（+）组均能抑制肿瘤生长，表明FSP1基因沉默和ROS生成对结肠癌治疗具有潜在疗效（图7F）。然而，FSP1/LNPs加激光照射组展现出FSP1 siRNA和Verteporfin的协同效应，具有最低的肿瘤重量和最佳的抗肿瘤效果（图7G）。此外，FSP1/LNPs（+）组的肿瘤坏死和凋亡水平升高，这通过H&E和TUNEL分析得以证实（图7I）。为评估生物安全性，研究者测量了小鼠的体重，结果显示各治疗组间无显著变化（图7H）。这些发现表明，FSP1/LNPs联合NIR激光照射能有效诱导铁死亡和氧化损伤，抑制肿瘤生长，同时具有良好的生物相容性和最小的副作用。

图7. FSP1/脂质纳米颗粒的生物分布与肿瘤生长抑制效果。(A)游离维替泊芬与FSP1/脂质纳米颗粒的生物分布特征评估。(B)治疗后24小时肿瘤及器官的荧光成像。(C)器官与肿瘤荧光信号定量分析。(D)通过光敏脂质纳米颗粒协同FSP1基因沉默与活性氧（ROS）生成抑制肿瘤生长的治疗方案。(E)第12天治疗小鼠肿瘤影像。(F)不同治疗组肿瘤体积评估。(G)各组第12天肿瘤重量对比。(H)小鼠在12天内的体重变化。(I)通过苏木精-伊红染色、TUNEL检测和CRT免疫荧光成像分析的肿瘤组织切片

（8）抗癌免疫反应的评价

鉴于光敏脂质纳米粒子（LNPs）能够诱导铁死亡和氧化应激，从而促进免疫原性细胞死亡（ICD）和树突状细胞（DCs）成熟，研究者假设这种治疗效果可能通过重塑免疫抑制性肿瘤微环境，在体内发挥结肠癌免疫治疗的作用。通过免疫荧光分析肿瘤组织切片发现，激光照射后的光动力疗法（PDT）效应显著增强了NC/LNPs（+）组的CRT表达水平，而FSP1/LNPs（+）组则展现出更强的协同效应（图8F）。已知释放的损伤相关分子模式（DAMPs）对于刺激对癌细胞的免疫攻击至关重要。因此，研究者分离了肿瘤引流淋巴结，以探究其免疫活性。流式细胞仪结果显示，CD45+MHC-II+CD11c+组中成熟DCs的比例从对照组的10.51%增加到NC/LNPs（+）组的19.82%，进一步增加到FSP1/LNPs（+）组的24.57%（图8A、B）。由于成熟的DCs更有效地将肿瘤抗原呈递给T细胞，研究者推测FSP1/LNPs联合光照能够显著促进DC成熟，从而促进T细胞激活和分化，实现有效的免疫治疗。

为探索光敏LNPs治疗后的系统性抗肿瘤免疫反应，研究者构建了CT26双侧肿瘤模型。经系统给药后，仅在右侧腹侧的原发部位进行光照。远处肿瘤组织可以模拟结肠癌的侵袭和转移，以评估LNPs引发的系统性免疫激活。在14天的观察期内，FSP1/LNPs（+）组显著抑制了原发和远处肿瘤组织的进展（图8D、E）。14天时收集并成像肿瘤（图8F、G）。结果显示，FSP1/LNPs（+）组的肿瘤抑制效果最佳，肿瘤重量最小，这与上述发现一致（图8H）。值得注意的是，FSP1/LNPs在远处肿瘤组织中也显示出显著的抑制效果，表明治疗后系统性抗肿瘤免疫反应增强（图8I）。

为阐明介导系统性抗肿瘤免疫的潜在机制，研究者首先测量了原发肿瘤微环境中免疫抑制T细胞的比例。流式细胞仪结果显示，与对照组相比，NC/LNPs（+）组降低了CD45+CD3+CD4+组中FoxP3+调节性T细胞的比例，从13.45%降至6.6%。而FSP1/LNPs（+）组进一步将其降低至2.6%，表明FSP1基因沉默和ROS生成的协同作用能够重塑免疫抑制性肿瘤微环境（图8J、L）。此外，对脾细胞的流式细胞仪分析显示，与NC/LNPs处理相比，FSP1/LNPs（+）处理使CD3+CD8+组中效应记忆T细胞（CD44+CD62L−）的比例从9.98%增加到38.74%（图8K、M）。效应记忆T细胞在抗原识别后能够迅速产生细胞因子和细胞毒性分子，对肿瘤免疫反应至关重要，可防止转移和复发。最后，还通过流式细胞仪检测了原发和远处肿瘤中肿瘤浸润性细胞毒性T淋巴细胞的激活状态，结果显示，与对照组相比，FSP1/LNPs（+）处理显著增加了原发和远处肿瘤中CD45+CD3+组内CD8+细胞毒性T淋巴细胞的比例（图8N、O）。由于细胞毒性T淋巴细胞能够识别并直接杀死癌细胞，FSP1/LNPs诱导的高效T细胞激活有助于更好的肿瘤抑制效果和抗肿瘤免疫。综上所述，这些双侧肿瘤模型中的免疫表型结果表明，FSP1/LNPs能够通过激活T细胞和协调抗肿瘤免疫反应，重塑免疫抑制性肿瘤微环境，并实现持久的肿瘤抑制。

图8. FSP1/光敏脂质纳米颗粒的抗癌免疫应答与远端肿瘤抑制作用。(A)肿瘤引流淋巴结中树突状细胞成熟度评估。(B)CD80+CD86+成熟树突状细胞定量分析。(C)利用光敏脂质纳米颗粒刺激全身抗肿瘤免疫的治疗方案。(D)小鼠原发肿瘤体积变化。(E)远端肿瘤体积变化。(F)第14天原发肿瘤影像图。(G)远端肿瘤影像图。(H)第14天原发肿瘤重量。(I)第14天远端肿瘤重量（。(J)原发肿瘤内FoxP3+调节性T细胞流式细胞术检测。(K)脾脏样本中效应记忆T细胞（CD44+CD62L−）分析。(L)FoxP3+调节性T细胞的定量结果。(M)效应记忆T细胞的定量分析。(N)原发肿瘤内CD8+ T淋巴细胞的定量结果。(O)远端肿瘤内CD8+ T淋巴细胞的定量结果