图1. PB抑制MIRI中PANoptosis的机制示意图。

图2. MIRI作为代表性PANoptosis驱动疾病模型。a) 人急性心肌梗死缺血区（IZ）、远端区（RZ）和边缘区（BZ）示意图。b) 对照组与IZ组细胞分布的UMAP可视化（左）及注释细胞类型（右）。c) 心肌细胞亚群定量（左）及UMAP聚类（右）。d,e) 各心脏细胞类型PANoptosis激活的UMAP投影（D）及箱线图（E）。f) 比较两组PANoptosis相关基因表达的小提琴图。g,h) 对照组与IZ组心肌细胞特异性UMAP（G）及PANoptosis水平定量（H）。i) 心肌细胞亚群比例。j,k) 各心肌细胞亚型中凋亡/PANoptosis/焦亡/坏死性凋亡激活模式（J）及PANoptosis相关基因（K）的热图。

（2）PB与PANoptosis相关蛋白相互作用的计算模拟

为阐明PB与PANoptosome核心组分的相互作用，该团队进行了分子动力学模拟。目前，ZBP1、RIPK1和AIM2 PANoptosome已在分子水平得到表征。模拟系统经RMSD平衡验证具有稳健性。对于AIM2系统，PB显著干扰AIM2 HIN结构域构象，接触残基主要集中在带电荷的Arg和Lys残基上，总相互作用能达−267.4 kJ/mol，以静电作用力为主；而PB对AIM2 PYD结构域构象影响较弱。对于ZBP1，PB结合能为−157.9 kJ/mol，关键界面残基Arg135/Lys138处的静电作用主导了PB表面粘附，同时半径回旋（Rg）轨迹分析显示ZBP1结构发生压缩，可能破坏Zα结构域介导的dsDNA识别。对于RIPK1，PB紧密结合于其C端片段，涉及N端螺旋结构域转角区的Glu98、Met99、Pro102、Leu103、Thr244、Tyr246、Ser282和Gln283等关键残基，整体相互作用能为−73.2 kJ/mol，范德华相互作用占主导，特别是Tyr与PB之间的强相互作用。这些结果为PB调控PANoptosis病理进展提供了治疗策略依据。

图3. PB与PANoptosis相关蛋白相互作用的计算模拟。a) PB-AIM2HIN模拟系统的初始和最终快照（200 ns）。b,c) AIM2HIN两条链与PB的残基接触细节。d,e) AIM2HIN接触残基与PB的相互作用能分析（n = 10）。f) PB-AIM2HIN中PB与蛋白相互作用能随时间变化。g-i) PB-ZBP1系统模拟结束时的构象（G）、残基接触细节及相互作用能分析（H），以及相互作用能随时间变化（I）。j-l) PB-RIPK1系统模拟结束时的构象（J）、残基接触细节及相互作用能分析（K），以及相互作用能随时间变化（L）。

（3）PB@PM的构建及心脏靶向效率

基于分子动力学模拟数据和生物医学纳米技术需求，该团队通过单前驱体介导的一步水热法合成PB纳米颗粒，以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）作为还原剂和分散稳定剂。SEM和TEM揭示了纳米颗粒的形貌、尺寸和均一性；元素映射、XRD、XPS、UV-Vis-NIR和FTIR等全面材料表征确认了PB的成功构建。为实现靶向递送，采用野生型小鼠血小板膜（PM）包被PB构建PB@PM。TEM、Western blotting、荧光共定位、DLS和zeta电位结果均证实PB@PM成功构建，其中Western blotting证实PB@PM表面保留了血小板特异性蛋白（CD41、CD42b、CD47和GP6）。体内荧光成像分析显示，在MIRI小鼠中，PB@PM在缺血心肌区域的荧光强度在给药后12 h和24 h均显著高于PB处理组，且肝脏、脾脏、肺和肾脏的荧光强度在各组间无显著差异，表明PB@PM具有优异的心肌靶向效率和持续滞留能力。此外，血液学分析和主要器官H&E染色未见明显病理改变，证实了良好的生物安全性。

图4. PB@PM的构建及其心脏靶向效率。a) PB的SEM图像。比例尺，200 nm。b) PB的TEM图像。比例尺，200 nm。c) PB的元素映射。比例尺，100 nm。d) PB@PM的TEM图像。比例尺，50 nm。e) PM和PB@PM中CD41、CD42b、CD47和GP6表达的Western blot分析。f) PB@PM中PB与PM的荧光共定位；对照为FITC标记PB（绿色）和Dil标记PM（红色）的直接混合物。比例尺，10 μm。g) 给药后12 h和24 h主要器官的离体荧光图像。h,i) 各组心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏荧光强度的定量分析（n = 3）。

（4）PB@PM在MIRI中的治疗效果

该团队通过小鼠MIRI模型评估了PB@PM的治疗潜力。超声心动图连续监测显示，术后14天和28天，PB@PM治疗组在LVEF、LVFS、LVESV和LVEDV等心功能参数上均显著优于MIRI组和PB组，且PB@PM治疗效果优于未包被的PB。术后28天组织学评估中，Masson三色染色和H&E染色显示PB@PM显著减轻MIRI诱导的心肌萎缩、心室壁变薄和过度胶原纤维沉积。急性期（术后3天）Evans blue/TTC双染色定量分析表明，PB@PM组梗死区/危险区比值（IF/AAR）显著降低。TUNEL染色显示PB@PM显著减少梗死边缘区TUNEL阳性心肌细胞数量。免疫荧光分析进一步揭示，PB@PM显著减少CD86阳性M1型巨噬细胞和Ly6G阳性中性粒细胞的浸润，并促进抗炎M2极化（上调IL-10和TGF-β，下调TNF-α、IL-1β和IL-6）。在修复期，PB@PM处理组梗死周边区的I型和III型胶原、α-SMA阳性肌成纤维细胞及CD31阳性血管内皮细胞表达水平最高，同时有效减轻病理性心肌细胞肥大。这些结果表明PB@PM通过协同促进细胞外基质重塑、血管生成和抑制不良心肌重构，发挥显著的心脏保护作用。

图5. PB@PM改善心功能并减轻梗死后重塑。a-e) 术前及术后1、14、28天的超声心动图分析，包括LVEF（B）、LVFS（C）、LVESV（D）和LVEDV（E）。比例尺，100 ms。f) 术后28天心脏的Masson和HE染色代表性图像。比例尺，1 mm。g) 术后28天心脏纤维化定量。h) 术后3天Evans blue/TTC染色及定量分析，显示各组心肌细胞存活和血液灌注情况。比例尺，1 mm。i,j) 梗死周边区TUNEL（红色）和cTnT（绿色）共染色及定量。比例尺，50 μm。k,l) 梗死周边区CD86免疫荧光代表性图像及定量。比例尺，1 mm或50 μm。m,n) 梗死周边区Ly-6G免疫荧光染色及定量。比例尺，1 mm或50 μm。o-r) 梗死周边区α-SMA（红色）/cTnT（绿色）和CD31（红色）/cTnT（绿色）免疫荧光染色及定量。比例尺，1 mm或50 μm。（4）PB@PM在MIRI中的治疗效果。

（5）PB@PM全面阻断焦亡、凋亡和坏死性凋亡之间的crosstalk

为阐明PB@PM抑制PANoptosis的分子机制，该团队对术后3天心肌组织进行了转录组测序。PCA显示PB@PM处理组与MIRI组具有显著不同的聚类模式。与MIRI组相比，PB@PM治疗诱导了1875个上调和2752个下调的差异表达基因（DEGs）。GSVA分析显示，MIRI组中焦亡、凋亡和坏死性凋亡通路表达显著升高，而PB@PM治疗组中这些通路均被显著下调。KEGG富集分析表明，PB@PM显著抑制了与焦亡、凋亡、坏死性凋亡以及NF-κB、TNF、趋化因子和Toll样受体信号通路相关的分子通路。GSEA网络图和蛋白网络进一步显示，这三种死亡通路紧密互连、相互增强；PB@PM处理后其表达水平显著降低，接近Sham组。Western blot系统验证显示，MIRI组中AIM2、ZBP1、Pyrin、ASC、FADD、凋亡标志物（cleaved caspase 3/8、Bax）、坏死性凋亡标志物（p-RIPK1、RIPK3、p-RIPK3、MLKL、p-MLKL）和焦亡标志物（cleaved caspase 1、NLRP3、GSDMD、cleaved-GSDMD）均显著上调，而PB@PM显著下调了这些PANoptosis相关蛋白的表达，并上调Bcl-2。此外，PB@PM显著抑制了ASC与caspase 1/8的共定位，而这两者共定位对PANoptosome复合物组装至关重要。机制上，PB@PM通过双重途径发挥作用：（1）直接靶向：高亲和力结合并功能抑制核心PANoptosome组分（RIPK1、ZBP1和AIM2），破坏PANoptosis启动；（2）间接缓解：强效清除ROS（•OH和•OOH），保护线粒体膜电位和氧化磷酸化功能，消除PANoptosome激活的关键上游触发因素，并恢复免疫炎症稳态。

图6. PB@PM在体内全面阻断焦亡、凋亡和坏死性凋亡之间的crosstalk。a) RNA-seq数据的PCA分析（Sham：橙色；MIRI：绿色；PB@PM：蓝色；n = 5）。b) PB@PM vs MIRI的差异表达基因火山图。c) Sham-MIRI与PB@PM-MIRI比较中共享DEG的Venn图。d) 各组通路富集的GSVA分析。e) PB@PM vs MIRI下调基因的KEGG通路富集。f,g) 焦亡、凋亡和坏死性凋亡的GSEA网络（F）及蛋白相互作用网络（G）。h) PB@PM组相比MIRI组焦亡、凋亡和坏死性凋亡显著下调的GSEA图。i) 各组中焦亡、凋亡和坏死性凋亡的Pearson相关性分析。j) 缺血心肌中PANoptosis相关蛋白（AIM2、ZBP1、Pyrin、ASC、FADD、Bax、Bcl-2、磷酸化/总RIPK1/RIPK3/MLKL、cleaved/总caspase-1/3/8和GSDMD）的Western blot（n = 5）。